儲存條件:2~8℃
產(chǎn)品簡介
iPS細胞消化液可以應(yīng)用于非飼養(yǎng)層依賴的iPS傳代,該工作液屬于非酶類溫和消化液,對細胞損傷小且消化時間適中便于操作,是一種已被普遍使用的消化液,可與iPS培養(yǎng)基搭配使用。
操作說明
1.將iPS完全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫,取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶,吸去包被液并加入適量完全培養(yǎng)基,置于5%CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。
2.吸走待傳代細胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS完全培養(yǎng)基,并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。
3.加入0.5mM EDTA傳代工作液使之完全覆蓋皿/瓶底。
4.室溫放置5~8 min或37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中孵育3~5 min,顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底,克隆內(nèi)部大部分細胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離,肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發(fā)白,表明細胞消化時間理想。
5.吸去傳代工作液,即刻加入新鮮的iPS完全培養(yǎng)基,用移液器扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底,使皿/瓶底貼附的干細胞集落脫落,輕柔緩慢吹吸混勻。
注:吹吸的力度要輕柔,吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜。吹打過度導致大量單細胞出現(xiàn)是造成細胞分化或死亡的重要原因。
注:如有少量細胞無法從皿底脫落,屬于正?,F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落,需延長消化時間。
6.顯微鏡下觀察細胞呈4~20個細胞大小的團塊,水平十字搖勻。
7.將細胞置于5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
8.每天換液直至達到可以傳代的標準。
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