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人骨髓瘤細(xì)胞
    人骨髓瘤細(xì)胞
  • 平臺(tái)編號(hào):bio-53534
  • 細(xì)胞信息: U266 [U266B1]
  • 規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
  • 用途:(STR鑒定正確)
  • 服務(wù)費(fèi)用及說明書:
    加載中……
  • 訂購
  • 注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn))

  細(xì)胞介紹

  該細(xì)胞來源于多發(fā)性骨髓瘤男性患者,表達(dá)IgG,分泌IL-6。

  細(xì)胞特性

  1)來源:人骨髓

  2)形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣,懸浮生長

  3)含量:>1x106細(xì)胞數(shù)

  4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

  5)用途:僅供科研使用。

  運(yùn)輸和保存

  干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

 ?。?)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

  (2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

  細(xì)胞接收后的處理

  1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

  2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

  3)懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。

  4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。

  一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

  1)準(zhǔn)備RPMI-1640(含NaHCO3 1.5g/L推薦GIBCO,貨號(hào)31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,或者ATCC-formulated RPMI-1640 Medium,Catalog No.30-2001 ATCC改良)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,15%;雙抗,1%。(注意:該細(xì)胞培養(yǎng)PH值不超過7.0)

  2)該細(xì)胞在1640(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好,大部分品牌的1640含有較高濃度的NaHCO3(3.7g/L),若使用1640(3.7g/L NaHCO3)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提高CO2濃度(7%-10%)。

  3)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

  4)凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+8%DMSO(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí))。

  二.細(xì)胞處理:

  1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

  將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

  2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

  對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

  懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同,)可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

  3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

  下面T25瓶為例;

  1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

  2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

  將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用

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