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細(xì)胞系包裹收到后，請(qǐng)按下列方法操作。　

①培養(yǎng)基：complete growth medium: Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10% 如果沒有CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)基中需加入5克/升HEPES。,Temperature: ﹤18.0C,

②。

③

一．貼壁細(xì)胞

1．嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

2．將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（此培養(yǎng)基可再用）。

3．加入消化液1～1.5ml，﹤18.0C,消化直到細(xì)胞脫落。

4．換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，加入步驟2的培養(yǎng)基8ml，再在﹤18.0C,，5％CO2下培養(yǎng)。

二．懸浮細(xì)胞

1．嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

2．將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管移到離心管中。（嚴(yán)禁直接傾倒）

3．在1000rpm，10min離心。

4．將上清吸到另一無菌容器中，（此培養(yǎng)基可再用）。

5．對(duì)沉淀用步驟4的培養(yǎng)基再懸浮。

6．換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶，在﹤18.0C,，5％CO2下培養(yǎng)。

三．半貼壁細(xì)胞

1．參照上述1、2操作。

四．二毫升小管操作方法 小管內(nèi)也是此細(xì)胞。 

1．此管內(nèi)細(xì)胞濃度在1-5 X 105個(gè)，將24孔克隆板的一排6孔每孔內(nèi)加1毫升培養(yǎng)基；

2．將小管無菌開啟，細(xì)胞吸入第1孔內(nèi)，倍比稀釋至2孔，再倍比稀釋至3孔，最后至6孔；

3．在﹤18.0C,，5％CO2下培養(yǎng)，1周內(nèi)應(yīng)有某孔至細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)生長期，取出細(xì)胞至T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，常規(guī)培養(yǎng)。

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