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細(xì)胞CELL>
biobw自建細(xì)胞系>
牙鲆細(xì)胞細(xì)胞系包裹收到后,請(qǐng)按下列方法操作。
①培養(yǎng)基:complete growth medium: Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10% 如果沒有CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)基中需加入5克/升HEPES。,Temperature: ﹤18.0C,
②。
③
一.貼壁細(xì)胞
1.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
2.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(此培養(yǎng)基可再用)。
3.加入消化液1~1.5ml,﹤18.0C,消化直到細(xì)胞脫落。
4.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,加入步驟2的培養(yǎng)基8ml,再在﹤18.0C,,5%CO2下培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
2.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)50ml培養(yǎng)基用吸管移到離心管中。(嚴(yán)禁直接傾倒)
3.在1000rpm,10min離心。
4.將上清吸到另一無菌容器中,(此培養(yǎng)基可再用)。
5.對(duì)沉淀用步驟4的培養(yǎng)基再懸浮。
6.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶,在﹤18.0C,,5%CO2下培養(yǎng)。
三.半貼壁細(xì)胞
1.參照上述1、2操作。
四.二毫升小管操作方法 小管內(nèi)也是此細(xì)胞。
1.此管內(nèi)細(xì)胞濃度在1-5 X 105個(gè),將24孔克隆板的一排6孔每孔內(nèi)加1毫升培養(yǎng)基;
2.將小管無菌開啟,細(xì)胞吸入第1孔內(nèi),倍比稀釋至2孔,再倍比稀釋至3孔,最后至6孔;
3.在﹤18.0C,,5%CO2下培養(yǎng),1周內(nèi)應(yīng)有某孔至細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)生長期,取出細(xì)胞至T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,常規(guī)培養(yǎng)。
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