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小鼠T細胞 細胞名稱:CTLL-2,小鼠T淋巴細胞
規(guī)格:T25瓶或者2ml凍存管
生長特性:懸浮生長傳代比例:持細胞濃度在1×105~2×106/ml
培養(yǎng)條件:90%RPMI-1640,10%胎牛血清(優(yōu)質(zhì)),100U/ml rmIL-2,100U/ml雙抗,37℃,5%CO2
凍存條件:70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO
僅供科研使用,不可用于臨床診斷和治療
凍存細胞接收后的處理:
1)干冰運輸,收到細胞后推薦直接復(fù)蘇1管,另一管放入-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮,細胞直接轉(zhuǎn)入液氮暫存可能導(dǎo)致細胞復(fù)蘇率降低。
2)收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)完全揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。
復(fù)蘇細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液,培養(yǎng)液是否混濁,如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。
2)在顯微鏡下確認細胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片2~3組以及培養(yǎng)瓶外觀照留存。
3)75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后,鏡檢觀察細胞密度未達到80-90%時,將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,離心后棄去上清,用新鮮完全培養(yǎng)基重懸后加入T25培養(yǎng)瓶或60mm皿中,補加適量培養(yǎng)基,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基。
4)如您收到細胞7天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題,出現(xiàn)的細胞問題將不提供免費重發(fā)服務(wù)。
注:發(fā)貨用培養(yǎng)基不可再次用來培養(yǎng)細胞
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①收集所有細胞懸液,1000rpm離心5min,小心棄去上清;
②加1-2ml新鮮完全培養(yǎng)基吹勻重懸后按照1:2比例加入2個T25培養(yǎng)瓶或60mm皿中,補加適量培養(yǎng)基,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
注:第一次傳代推薦1:2傳代,后續(xù)可根據(jù)細胞生長以及客戶需求自行確定。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml新鮮完全培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶或者60mm培養(yǎng)皿中,補加適量培養(yǎng)基,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存
①收集所有細胞懸液,可細胞計數(shù),1000rpm離心5min,棄上清;
②加入配制好的凍存培養(yǎng)液重懸細胞,凍存液的添加量按細胞最終濃度為1~10×106/ml添加。
③將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
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