非模式菌株假長隱球酵母的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝！
小楊 / 2024-10-11 09:07:57
假長隱球酵母是Cryptococcus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。擔(dān)子菌門，銀耳綱，銀耳科。主要用途為研究。
一、菌種簡介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Cryptococcus Pseudolongus
拉丁學(xué)名：Cryptococcus pseudolongus
原始編號：RT-1
菌株來源：←中國科學(xué)院微生物研究所
保藏人：王啟明
直接來源國家：中國
保藏時間：5/14/2007
生物危害：四類
模式菌株：非模式菌株
菌株用途：研究
培養(yǎng)溫度：17℃
培養(yǎng)基：013
其他培養(yǎng)條件
分離源：植物
采集地點：海南省?？谑屑t樹林
采集國家：中國
描述：研究
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、培養(yǎng)條件
營養(yǎng)肉汁瓊脂
蛋白胨 10 克 NaCl 5 克
蒸餾水 1000ml 牛肉提取物 3 克
瓊脂 15 克 pH=7.0
三、微生物培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟：
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展,使之分布均勻。
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
②糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃):是適用范圍最廣的微生物保存法。
五、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、菌種恢復(fù)培養(yǎng)前，建議將收到的菌種安瓿保存在 6-10°C 的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，如在說明建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應(yīng)的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成，有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種培養(yǎng)穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
3、初次使用時請嚴(yán)格按照本說明書推薦條件和操作步驟進行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負責(zé)任。
4、恢復(fù)培養(yǎng)厭氧菌時，在操作過程中應(yīng)嚴(yán)格控制厭氧條件：制作培養(yǎng)基時，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)基中的氧氣，使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
六、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂（應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇），用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml（建議勿超過 0.5ml）適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂)，滴入管內(nèi)，輕輕振蕩，待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀，在用無菌吸管吸取全部菌懸液接在 1-2 支建議的培養(yǎng)基試管中（不超過 2 支，中國微生物菌種查詢網(wǎng)提供的培養(yǎng)基配方中有瓊脂，請務(wù)必做成試管斜面，配方中沒有瓊脂，試管中液體培養(yǎng)基不超過 5ml），并在建議的條件下靜止培養(yǎng)。
3、凍干管打開后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護設(shè)備中進行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠離面部，保護眼睛。
5、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
6、菌種復(fù)蘇時，請務(wù)必記錄好菌種的編號和制備批號，否則不予售后。
歡迎訪問
微生物菌種查詢網(wǎng)，本站隸屬于北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司，單位現(xiàn)提供微生物菌種及其細胞等相關(guān)產(chǎn)品查詢、咨詢、訂購、售后服務(wù)！與國內(nèi)外多家研制單位，生物醫(yī)藥，第三方檢測機構(gòu)，科研院所有著良好穩(wěn)定的長期合作關(guān)系！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：近根藤黃色桿菌的形態(tài)特征與主要用途及培養(yǎng)方法！
下一篇：生物發(fā)酵罐操作前設(shè)備檢查與參數(shù)設(shè)置及使用注意事項！